产品简介：

Hoechst 33258也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，分子式为C25H24N6O ·

3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA染色。

Hoechst 33258的激发波长为346nm，发射波长为460nm，Hoechst 33258和双链DNA结合后， 激发波长为352nm， 发射波长为461nm。 Leagene Hoechst 33258染色液(50×)可用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

产品组成：

试剂(A): Hoechst 33258浓缩液(50×)

1ml

-20℃ 避光

试剂(B): Hoechst Buffer

50ml

4℃

使用说明书

1份

自备材料：

荧光显微镜

蒸馏水

微量移液器

PBS或生理盐水

操作步骤(仅供参考)：

(一)固定的组织细胞染色

1、配制Hoechst 33258染色工作液：按Hoechst 33258浓缩液(50×)：Hoechst Buffer=1:50的比例混合，即为Hoechst 33258染色工作液。

2、对于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色工作液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积以上的Hoechst 33258染色工作液，充分混匀。

3、室温放置5～8min。

4、轻轻吸除Hoechst 33258染色工作液。

5、用无菌的PBS或生理盐水清洗2～3次，每次3～5min。

6直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。

(二)活细胞染色

1、配制Hoechst 33258染色工作液：按Hoechst 33258浓缩液(50×)：Hoechst Buffer=1:50的比例混合，即为Hoechst 33258染色工作液。

2、取96、24、6孔板培养细胞至合适状态，按96孔板加入100μl、24孔板加入500μl、6孔板加入1ml的比例，加入适当的Hoechst 33258染色工作液，染液必须充分覆盖细胞。

3、在适宜于细胞培养的条件下培养20～30min。

4、轻轻吸除Hoechst 33258染色工作液。

5、用无菌的PBS或生理盐水清洗2～3次，每次3～5min。

6、进行荧光检测。

注意事项：

Hoechst 33258染色液的浓度可根据具体实验自行调节，如40倍稀释。

荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。

为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

避免反复冻融，否则容易失效。

Hoechst 33258对人体有刺激性，请注意适当防护。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。