琼脂糖凝胶 4B 琼脂糖凝胶 4B 是用 4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。 1 理化指标 项 目 指 标 基质 4%琼脂糖凝胶 分离范围 70000~20×10 6 (球蛋白) 粒径 45~165 μm 推荐流速 11 cm/h * 耐压 0.018 MPa pH 适用范围 4~9 化学稳定性 可耐 8mol/L 尿素、6mol/L 盐酸胍 *检测条件： 层析柱 10mm×300mm *柱床高 5cm，25℃，流动相为 0.1mol/LNaCl。 2 贮存 产品应密封贮存在 4℃~25℃（保存溶液为 20%乙醇）通风、干燥、清洁的地方，不能冷冻。用过的 柱子贮存在 4℃（20%乙醇），保质期：2 年。 3 应用 本产品为传统的琼脂糖介质，具有非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量 差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。 3.1 装柱 （1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。 （2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。 （3）根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉 20%乙醇。 （4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。 （5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶 在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 （6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填 料最大耐压）。 上海源叶生物科技有限公司 400-666-5481 www.shyuanye.com 3.2 平衡 上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积，直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的 pH 值和电导值等于 上柱 Buffer 的 pH 值和电导值）。 3.3 上样 （1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样（0.45um 滤膜），如果样品盐浓度太大，则 需要处理后再上样。 （2）推荐的上样量不超过柱体积的 5%。 3.4 洗脱 用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。 3.5 再生 一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质体物质在再生过程中洗 脱不掉。出现下面这些情况，是必须需要清洗再生的： （1）背压增加； （2）色谱柱顶部的颜色变化； （3）分辨率降低； （4）转换接头和凝胶表面之间出现空隙。 如果观察到压力增大，在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染，然后 通过用 0.1M NaOH 洗涤柱子，除去沉淀的蛋白质，非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。 4 注意事项 （1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的 正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。 （2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。 （3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。