试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 100 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂 10mg×1 支 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 2mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 粉剂 0.5g×1 瓶 | 常温保存 |
溶液的配制：
试剂一：临用前加1mL蒸馏水溶解，用水稀释10倍，备用，即1mg/mL。
产品说明：
蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。因此，测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外，蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。先用碱与样本共热，破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm 下有特征吸收峰。
技术指标：
最低检出限：0.0316 mg/mL
线性范围：0.039-12 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取0.1g 样本，常温研碎，加入0.5mL 提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于80℃水浴锅中10min， 振荡3~5 次，冷却后，4000g，25℃离心10min，取上清，加入2mg试剂五，80℃脱色30min，再加入0.5mL 提取液，4000g，25℃离心10min，取上清液测定。
二、测定步骤
1、 可见分光光度/酶标仪计预热30min 以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 | | | 25 |
试剂一 | | 25 | |
蒸馏水 | 25 | | |
试剂二 | 15 | 15 | 15 |
混匀，100℃煮沸5min左右（盖紧，防止水分散失） |
试剂三 | 175 | 175 | 175 |
试剂四 | 50 | 50 | 50 |
混匀，沸水浴 10min 左右，冷却后取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm 处的吸光值，空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。
三、蔗糖含量计算
1、按照样本蛋白浓度计算
蔗糖含量（mg/mg prot）= (C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、按照样本质量计算
蔗糖含量(mg/g 质量）=(C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
C 标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
当样本吸光值大于 1.4 时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。
