试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
标准品：10 mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%）。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解备用，4℃可保存 2 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
产品说明：
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等， 是最常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。
加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样本中还原糖的量。
Reducing Sugar+3,5-Dinitrosalicylic Acid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm
技术指标：
最低检出限：0.0616 mg/mL
线性范围：0.1-0.6 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机，可调式移液器、超声破碎仪，微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。
2、 组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，
25℃离心 10min，取上清供测定用。
3、 血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）加入 0.9mL 试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL。
3、标准品稀释表
序号 | 稀释前浓度（mg/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL ） | 稀释后浓度（mg/mL） |
1 | 10 | 300 | 2700 | 1 |
2 | 1 | 600 | 400 | 0.6 |
3 | 1 | 500 | 500 | 0.5 |
4 | 1 | 400 | 600 | 0.4 |
5 | 1 | 300 | 700 | 0.3 |
6 | 1 | 200 | 800 | 0.2 |
7 | 1 | 100 | 900 | 0.1 |
实验中每个标准管需 175μL 标准溶液
4、在 EP 管中加入下列试剂：
试剂（μL） | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 175 | 175 | - | - |
标准品 | - | - | 175 | - |
试剂二 | - | 125 | 125 | 125 |
蒸馏水 | 125 | - |
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