还原糖含量检测试剂盒（可见分光光度法）

产品组成：

溶液的配制：

标准品：10 mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%）。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解备用，2-8℃保存 2 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

产品说明：

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等， 是最常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样本中还原糖的含量。

Reducing Sugar+3,5-Dinitrosalicylic Acid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）

技术指标：

最低检出限：0.487mg/ml

线性范围：0.05-0.25 mg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、离心机，可调式移液器、超声破碎仪，1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或细胞的处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一
（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 1000 万细菌或细胞加入 2mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴， 功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，常温离心 10min，取上清供测定用。

2、组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g 组织加入 2mL 试剂一），冰浴匀浆。转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，常温离心 10min，取上清供测定用。

3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议取约 0.2mL 血清
（浆）加入 1.8mL 试剂一），冰浴匀浆。转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min

并且振荡 8~10 次，8000g，常温离心 10min，取上清供测定用。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 0.25、0.2、0.15、0.1、0.05 mg/mL。
3、标准品稀释表

实验中每个标准管需 700μL 标准溶液。

4、在 EP 管中加入下列试剂：

混合均匀，在沸水浴加热 5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，混匀。取 1mL 至玻璃比色皿中，在 540nm 波长下读取标准管、对照管、测定管和空白管吸光值。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管和标准曲线只需做 1-2 次。

三、还原糖含量计算
1、标准曲线的建立：

根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度 ΔA 标准（x，ΔA 标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将 ΔA

测定（x，ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（y，mg/mL）。

2、按样本质量计算：

还原糖(μg/g 质量)=1000×y×V1÷W=200 0×y÷W

3、按样本蛋白浓度计算：

还原糖(μg/mg prot)= 1000×y×V1÷（V1×Cpr ）= 1000× y÷Cpr

4、按细菌或细胞数量计算：

还原糖(μg /104 cell)= 1000×y×V1÷ 1000=2×y

5、按血清（浆）体积计算：

还原糖(μg/mL)=1000×y×V2÷V3=10000×y

1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入试剂一体积，2mL；V2：加入血清（浆）和试剂一总体积，2mL；V3：