植物叶绿素（chlorophyll）含量检测试剂盒
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体×1 瓶（自备） | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、 提取液：自备无水乙醇和丙酮，将无水乙醇：丙酮（V：V）=1:2 混合待用，提供一个 125mL 空瓶。
产品说明：
植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，是光合作用的细胞器。其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素的含量。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板（建议使用非聚苯乙烯材质的96孔板）、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、锡箔纸、蒸馏水、10mL试管、无水乙醇和丙酮。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、取新鲜植物叶片或其它绿色组织，用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，去掉中脉，称取约 0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2、加入 1mL 蒸馏水，少量试剂一（约 10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入 10mL 试管中。
3、用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入 10mL 试管中，用提取液定容至 10mL，置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h，观察底部组织残渣颜色接近于白色则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至组织残渣颜色接近于白色。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至645nm和663nm，分光光度计用提取液调零。
2、 取上层浸提液200μL于微量玻璃比色皿/96孔板中（若使用聚苯乙烯材质的96孔板，请在5min内尽快测定完成）， 测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A663和A645。
三、叶绿素的计算
叶绿素a含量（mg/g 质量）=（21.2×A663-4.48×A645）×V提×F÷W÷1000 = 0.01×（21.2×A663-4.48×A645）×F÷W
叶绿素b含量（mg/g 质量）=（38.2×A645-7.8×A663）×V提×F÷W÷1000 = 0.01×（38.2×A645-7.8×A663）×F÷W
叶绿素总含量（mg/g 质量）=（33.7×A645+13.4×A663）×V提×F÷W÷1000= 0.01×（33.7×A645+13.4×A663）×F÷W
V提：提取液体积，10mL；F：稀释倍数；W：样本质量，g。
注意事项：
1、 叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
2、 一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。
3、 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至EP管。
4、 测定时吸光值超过1，可进行适当稀释；当吸光值小于0.05时，可以适当减少V提取的用量，注意计算公式中改变V提取数值。
5、 若使用聚苯乙烯材质的96孔板进行测定，请在5min内尽快测定完成。
