蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性检测试剂盒（可见分光光度法)
产品组成：
试剂名称 规格 保存条件
提取液 液体 30 mL×1 瓶 2-8℃保存
试剂一 液体 5 mL×1 瓶 -20℃保存
试剂二 粉剂 10 mg×1 支 2-8℃保存
试剂三 液体 5 mL×1 瓶 2-8℃保存
试剂四 液体 40 mL×1 瓶 2-8℃保存
试剂五 液体 10 mL×1 瓶 2-8℃保存
溶液的配制：
试剂二：临用前加 1 mL 水，配制成 10 mg/mL 蔗糖溶液，再将其用蒸馏水稀释为 500 μg/mL 备用。

产品简介：
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖磷酸合成酶（SPS）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶- 蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：

混匀，80℃水浴保温 20min，冷却后，12000rpm 常温离心 10min。吸取上清液在 480nm 下测定各管吸光值。计算ΔA 测=A 测定管-A 对照管，ΔA 标=A 标准管-A 空白管。
三、SPS 活力单位的计算
1、 按照蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性（U/mg prot）=（C 标准管×V1× ΔA 测÷ΔA 标）÷（V1×Cpr ）÷T=50× ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr 2、 按照样本质量计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性（U/g 质量）=（C 标准管×V 1×ΔA 测÷ΔA 标）÷（W×V1÷V2 ）÷T=50× ΔA 测÷ΔA 标÷W
C 标准管：标准管浓度，500μg/mL ；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10min。

注意事项：
尽量在 30min 内完成测定。