亚硝酸还原酶（NiR）活性检测试剂盒（可见分光光度法）

产品组成：
试剂名称 规格 保存条件
提取液 液体 30mL×1 瓶 2-8℃保存
试剂一 液体 8mL×1 瓶 2-8℃保存
试剂二 粉剂×2 瓶 2-8℃保存
试剂三 粉剂×1 瓶 2-8℃保存
试剂四 液体 25mL×1 瓶 2-8℃保存
试剂五 液体 25mL×1 瓶 2-8℃保存
标准品 液体 1mL×1 支 2-8℃保存
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入 6mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存 2 周；
2、 试剂三：临用前加入 15mL 蒸馏水，可 70-80℃加热溶解；2-8℃保存 3 个月。
3、 试剂五：若出现沉淀，可 70-80℃加热溶解；
4、 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠标准溶液；
5、 工作液：临用前根据样本量将试剂四和试剂五按 1:1 的比例混合，现用现配。
产品说明：
亚硝酸还原酶（Nitrite reductase，NiR）是亚硝态氮还原过程中的关键酶，在自然界氮素循环过程中发挥着重要作用，其广泛存在于微生物及植物体内，能够催化亚硝酸盐还原，减少亚硝态氮在环境中的积累，降低其对生物体生长发育的毒害作用。
亚硝酸还原酶可将NO -还原为NO，使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO -减少，即540nm处吸光值的变化可反应样本中亚硝酸还原酶的活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按样本质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10 比例（建议称取 0.1g 样本，加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于 4 ℃，10000g，离心 10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

2. 细菌或细胞：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000 : 1 的比例（建议 500 万细胞加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），然后于 4℃，10000g，离心 10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释：将10μmol/mL的标准溶液用蒸馏水稀释至0.08、0.06、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、
0.0015625μmol/mL标准溶液待测。
3、 标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需 350μL 标准溶液。

4、 样本测定：