植物类黄酮含量检测试剂盒说书
（微量法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 60 mL×1 瓶（自备） | 常温保存 |
试剂一 | 液体 2 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 2 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 15 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 液体 15 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 提取液：自备 60%乙醇，常温保存；
2、 标准品：10 mg 芦丁。临用前加入 1 mL 标准品稀释液配制成 10 mg/mL 标准液备用，2-8℃保存四周。
产品说明：
类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在470nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样本提取液在470nm处的吸光值，即可计算样本类黄酮含量。
Flavonoid+NaNO2+Al(NO3)3 → Red Chelate(470nm)
技术指标：
最低检出限：0.00818 mg/mL
线性范围：0.0097-5 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎仪、30-50目筛、超声清洗仪、60%乙醇、台式离心机、研钵、蒸馏水、水浴锅/恒温培养箱。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
将样本烘干至恒重，粉碎，过 30-50 目筛之后，称取约 0.1g，加入 1mL 提取液，用超声提取法进行提取，超声功率 300W，温度 60℃，提取 30min。12000rpm，25℃，离心 10min，取上清，用提取液定容至 1mL，待测。
二、测定步骤
- 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，分光光度计用蒸馏水调零。
- 标准溶液的制备：将10mg/mL芦丁标准溶液用标准品稀释液稀释至2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、
0.039mg/mL备用，具体稀释可参考下表。
序号 | 稀释前浓度（mg/mL） | 标准液体积（μL） | 标准品稀释液体积（μL） | 稀释后浓度（mg/mL） |
1 | 10 | 250 | 750 | 2.5 |
2 | 2.5 | 200 | 200 | 1.25 |
3 | 1.25 | 200 | 200 | 0.625 |
4 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 |
5 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 |
6 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.078 |
7 | 0.078 | 200 | 200 | 0.039 |
8 | 0.039 |
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