植物(Plant)水杨酸(SA)ELISA 检测试剂盒
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被水杨酸(SA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的水杨酸(SA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2、 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3、 植物萃取液或其它相关样本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测。
4、保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1、 酶标仪(450nm)
2、 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3、 37℃恒温箱 。
操作注意事项
1、试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2、实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3、 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
4、 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5、所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 备注 |
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微孔酶标板 | 12 孔×8 条 | 12 孔×4 条 | 无 |
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标准品 | 0.3mL*6 管 | 0.3mL*6 管 | 无 |
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样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
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检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
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20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
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底物 A | 6mL | 3mL | 无 |
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底物 B | 6mL | 3mL | 无 |
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终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
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封板膜 | 2 张 | 2 张 | 无 |
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说明书 | 1 份 | 1 份 | 无 |
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自封袋 | 1 个 | 1 个 | 无 |
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、0.5、1、2、4、8μg/g
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19份的蒸馏水。
洗板方法
1、手工洗