BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书
（微量法）
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在20-2000μg/ml内。
产品组成：
试剂A： 液体 20ml×1瓶， 4℃保存。
试剂B： 液体 1ml×1支， 4℃保存。
标准品： 0.5mg/mL：液体1ml×1支， -20℃保存。
产品说明：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。测定原理：碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰最强。
自备仪器和用品：
台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。
操作步骤：
一、样品中可溶性蛋白质提取：
- 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
- 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水），冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定操作：
- 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。
- 工作液置于60℃水浴预热30 min。
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
蒸馏水（μL） | 4 | | |
标准品（μL） | | 4 | |
待测液（μL） | | | 4 |
工作液（μL） | 200 | 200 | 200 |
混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。 |
注意：空白管和标准管只需要做一次。
三、计算公式：
Cpr (mg/mL)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
=0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
注意事项：
- BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-2000μg/ml 样品。测定前取1-2 个样做预实验，样品蛋白含量太高的话，请稀释至相应浓度范围内，以确保测定的准确性。
- 待测样品蛋白提取可用生理盐水、蒸馏水或PBS 提取。
- 由于受测定温度及时间等的影响，请严格按照给定条件测定。
