
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 60 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 A | 液体 0.4 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 B | 液体 1.6 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 2 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加 3mL 蒸馏水充分溶解;
2、 试剂三:临用前将 A 液倒入 B 液中混合,待用;
3、 标准品:1mg/mL 氮标准液。用蒸馏水稀释至 2μg/mL 备用。
产品说明:
脲酶(UE)广泛分布于植物的种子中,也存在于动物的血液和尿液中,某些微生物也能分泌脲酶。UE能够水解尿素产生氨和碳酸,对尿素转化起关键作用。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N来反应UE活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液),冰上匀浆后于 4℃,12000g 离心 15min,取上清待测。
2、细胞/细菌:按照细胞/细菌数量(104 个):提取液体积(mL)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万个细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 300w,超声 3 s,间隔 7 s,总时间 3min);然后 4℃,12000g 离心 15min,取上清置于冰上待测。
3、血清(浆)或其它液体:直接检测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至630nm,可见分光光度计蒸馏水调零。
2、 加样表:
试剂名称(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
样本 | | | 20 | 20 |
蒸馏水 | - | | | 40 |
试剂一 | - | - | 40 | - |
试剂二 | - | - | 80 | 80 |
充分混匀,于37℃反应1h,于EP管中或者96孔板中加入下列溶液 |
反应混合液 | - | - | 80 | 80 |
蒸馏水 | 80 | - | | |
标准液 | - | 80 | | |
试剂三 | 16 | 16 | 16 | 16 |
试剂四 | 12 |
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