人PECAM-1（血小板/内皮细胞粘附分子1）ELISA试剂盒
Human PECAM-1(Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1)ELISA Kit
用途
该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中PECAM-1活性。
基本性能
性能 | |
灵敏度 | 0.469ng/ml |
检测范围 | 0.781-50ng/ml |
特异性 | 可检测样本中的人PECAM-1，且与其它类似物无明显交叉反应 |
重复性 | 板内，板间变异系数均 < 10% |
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法。将目标抗体包被于酶标板上，分别向微孔中加入标准品和样本，其中的目标抗原与包被抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体特异性的结合形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，活性与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中的活性。
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8℃临时保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
中文名称 | 规格 | 开封后保存条件 |
ELISA 酶标板 Micro ELISA Plate | 96T：8 孔×12 条 48T：8 孔×6 条 | -20℃，可存放6个月 |
标准品 Standard | 96T：0.3mL×6 支 48T：0.3mL×6 支 |
HRP酶结合物 HRP Conjugate | 96T：1瓶10 mL 48T：1瓶5 mL | 2-8℃，可存放6个月 |
样品稀释液 Sample Diluent | 96T：1瓶6 mL 48T：1瓶3 mL |
浓缩洗涤液 (20×) Concentrated Wash Buffer (20×) | 96T/48T：1瓶 30 mL |
底物溶液 A Substrate Reagent A | 96T/48T：1瓶6 mL/3 mL | 2-8℃ |
底物溶液 B Substrate Reagent B | 96T/48T：1瓶6 mL/3 mL | 2-8℃(避光) |
反应终止液 Stop Solution | 96T/48T：1瓶6 mL/3 mL | 2-8℃ |
封板覆膜 Plate Sealer | 96T/48T：2张 |
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产品说明书 Manual | 1 份 |
说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品
- 酶标仪(450nm波长滤光片)
- 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
- 37℃恒温箱
- 双蒸水或去离子水
- 吸水纸
- 加样槽
样品收集方法
- 血清：全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测（收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管）。
- 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可检测（避免使用溶血，高血脂样品）。
- 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
- 细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
- 细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测
注意事项
试剂盒注意事项
- 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
- 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
- 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照上述表格中保存条件存放。
- 检测使用的酶标仪需要安装能检测450±10nm波长的滤光片，光密度范围在0-3.5之间。建议使用时提前15 分钟预热。
- 请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。
- 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用。
- 请勿使用过期的试剂。
样品注意事项
- 收集血液的试管应为一次性无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品。
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