Human CD13(Aminopeptidase N)ELISA Kit

用途

该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中CD13活性。

基本性能

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法。将目标抗体包被于酶标板上，分别向微孔中加入标准品和样本，其中的目标抗原与包被抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体特异性的结合形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，活性与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中的活性。

未拆封的试剂盒可在2-8℃临时保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱
4. 双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
6. 加样槽

样品收集方法

1. 血清：全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测（收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管）。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na₂，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可检测（避免使用溶血，高血脂样品）。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
4. 细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10⁶个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
5. 细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

试剂盒注意事项

1. 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
2. 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
3. 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照上述表格中保存条件存放。
4. 检测使用的酶标仪需要安装能检测450±10nm波长的滤光片，光密度范围在0-3.5之间。建议使用时提前15 分钟预热。
5. 请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。
6. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用。
7. 请勿使用过期的试剂。

样品注意事项

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