微量法

产品组成：

溶液的配制：

1、 提取液：低温条件下，可能有结晶析出，放于 60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。

2、 试剂二：临用前加入 3.5 mL 蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；

3、 试剂四：临用前取 1 支加入 0.2 mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

4、 试剂五：临用前加入 1 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

5、 试剂六：临用前取 1 支加入 0.25 mL 蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

6、 标准品：5 mg ATP。临用前加入 0.826 mL 蒸馏水配成 10 μmol/mL 的 ATP 标准溶液，用不完的试剂-20℃

分装保存 4 周，避免反复冻融；

7、 工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=0.2：0.2：

0.02：0.08：0.02 的比例配制（0.52mL，约 10T 的量），现配现用。

产品说明：

ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH， NADPH 在 340nm 有特征吸收峰，NADPH 和 ATP 含量成正比，以此反应 ATP 含量。

技术指标

最低检出限：0.0026 μmol/mL

线性范围：0.01953-3 μmol/mL

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰和氯仿。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 血清（浆）中 ATP 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL

血清（浆），加入 1mL 提取液），充分震荡，10000g，4℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL

的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2、 组织中 ATP 的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP 管中，加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀， 10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3、 细胞或细菌中 ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 2s，停 1s，总时间 1min），10000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入

500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

注：以上提取过程严格控制在冰浴条件下进行。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 340nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 标准溶液的稀释：取 100μL 10μmol/mLATP 标准溶液，加入 1.5mL 蒸馏水，充分混匀，配制成 0.625μmol/mL

标准液使用，现用现配。（实验中每管需要 20μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 加样表：在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入