尿素氮（BUN）含量检测试剂盒
微量法
产品内容：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存，临用前加2mL蒸馏水充分溶解。试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三A 液：液体 0.4mL×1 支，4℃保存；
试剂三B 液：液体1.6mL×1 瓶，4℃保存；临用前将A 液倒入B 液中混合，或者根据比例（A:B=1:4）现用现配；
试剂四：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1 瓶，4℃保存。10mg 尿素。临用前加入 4.66mL 蒸馏水配制成 1mg/mL 尿素氮标准液。
产品说明：
尿素（BUN）是人体蛋白质代谢的主要终末产物，BUN构成了血液中绝大部分的非蛋白质氮， 血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N，生成的蓝色靛酚和尿素氮的浓度成正比
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤：
一、样品处理
- 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水），冰上匀浆后于4℃，13000g 离心15min，取上清待测。
- 细胞：按照细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500-1000：1 的比例（建议500万个细胞加入1mL 蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 s，间隔7 s，总时间3min）；然后4℃，13000g 离心15min，取上清置于冰上待测。
- 血清（浆）或其它液体：直接检测。二、测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热 30min，波长调至 630nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、将 1mg/mL 尿素氮标准液用蒸馏水稀释至 50μg/mL 备用。
3、加样表：
试剂名称（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
样品 | | | 12 | 12 |
标准品 | | 12 | | - |
蒸馏水 | 12 | | | 24 |
试剂一 | 24 | 24 | 24 | - |
试剂二 | 44 | 44 | 44 | 44 |
充分混匀，于 37℃反应 10min， |
试剂三 | 16 | 16 | 16 | 16 |
试剂四 | 12 | 12 | 12 | 12 |
混匀，室温静止 30min。 |
蒸馏水 | 92 | 92 | 92 | 92 |
充分混匀后测定 630nm 处吸光值，记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管和 A 对照管。计算 ΔA 标准=A 标准管-A 空白管，ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。 |
三、计算公式：
- 按样本质量计算：
尿素氮含量（μg/g）= ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷W
=50×ΔA测定÷ΔA标准÷W。
- 按蛋白浓度计算：
尿素氮含量（μg/mg prot）=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷（Cpr×V提取）
=50×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr。
- 按细胞数计算：
尿素氮含量（μg/104 cell）= ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷细胞数量
=50×ΔA测定÷ΔA标准÷细胞数量。
- 按液体体积计算：
尿素氮含量（mg/mL）=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品
=50×ΔA测定÷ΔA标准。
C标准品：标准品浓度，50μg/mL；V提取：提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；细胞数量：以万计。
注意事项：
- 配制好的试剂一在2-8℃条
