ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 60 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体 80 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 20 μL×1 支 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体 1.5 mL×1 支 | -20℃保存 |
试剂五 | 粉剂×1 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入 3 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反复冻融；
2、 试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前根据样本量按试剂三（μL）：蒸馏水（mL）=1 μL:12 mL 的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在 4h 之内用完；
3、 试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存。临用前根据样本量按试剂四：试剂一（V:V）=1:9 的比例配成试剂四工作液，现配现用，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。
4、 试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有 5 mg 维生素 C。临用前加入 2.8 mL 提取液，充分振荡溶解； 配成 10 mmol/L 维生素 C 溶液，用于阳性对照。2-8℃可保存两周。
5、 ABTS 工作液的配制：临用前根据样本量按试剂一：试剂二：试剂三工作液（V:V:V）=76:5:4 的比例配成ABTS 工作液，现用现配，室温避光保存，务必在 30 分钟内使用。
产品说明：
ABTS 法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。ABTS 经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子 ABTS 自由基，在 405 nm 或 734 nm 处有最大吸收峰。被测物质加入 ABTS 自由基溶液后，所含抗氧化成分能与 ABTS 自由基发生反应而使反应体系褪色，405 nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除 ABTS 自由基的能力。
H2O2、POD Antioxidants
ABTS → ABTS·+ (405 nm) → ABTS
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50 目筛、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、植物组织样本的制备：将新鲜样本置于 60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过 30~50 目筛； 称取约 0.05 g 样本，加入 1 mL 提取液后置于 40℃水浴锅中浸提 30 min；10000 rpm 室温离心 10 min，取上清， 置于冰上待测。
2、红酒、果汁等液体样本：吸取 100 μL 样本溶液加入 900 μL 提取液，旋涡振荡混匀，室温 10000 rpm 离心10 min，取上清，置冰上待测。
3、提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如 5 mg/mL。
注意：不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整（如清除率大于 90%，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于 5%，建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取）。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 405 nm，蒸馏水调零。
2、阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将 10 mmol/L 的维生素 C 溶液用提取液配制成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1 mmol/L 的维生素 C 溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为 90%的阳性对照，则建议将 10 mmol/L维生素 C 溶液用提取液配制成大于 1.5 mmol/L 的维生素 C 溶液待用。
序号 | 稀释前浓度（mmol/L） | 维生素 C 溶液体积（μL） | 提取液体积（μL） | 稀释后浓度（mmol/L） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
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