NAD 激酶（NADK）活性检测试剂盒说明书
微量法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 60 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 支 | -20℃保存 |
试剂五 | 粉剂×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂六 | 粉剂×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂七 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂八 | 液体 14 μL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂九 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂十 | 液体 40 mL×1 瓶（自备） | |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂三：用时加入 3 mL 双蒸水，充分溶解，可分装保存，-20℃保存两周，禁止反复冻融；临用前取出一支稀释 100 倍使用。
2、 试剂四：用时加入 1 mL 双蒸水，充分溶解，4℃保存；
3、 试剂五：用时加入 2 mL 双蒸水，充分溶解，4℃保存；
4、 试剂六：用时加入 2 mL 双蒸水，充分溶解，4℃保存；
5、 试剂七：用时加入 2 mL 双蒸水，充分溶解，4℃避光保存；
6、 试剂八：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 0.986 mL 蒸馏水充分溶解，可分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
7、 试剂十：自备 95%乙醇；
8、 标准品：加入 1.9 mL 蒸馏水，即得 2 μmol/mL NADP 标品。临用前稀释 100 倍得 20 nmol/mL NADP 标准溶液备用。
产品说明：
NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内唯一能够催化 NAD+磷酸化生成 NADP+的酶，可催化 NAD(H)以 ATP 或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成 NADP(H)。因此，NAD 激酶在合成 NADP(H)以及调节 NAD(H)与 NADP(H)的平衡上具有重要作用。
NADK 催化 NAD+磷酸化，生成 NADP+；NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为 NADPH；NADPH 通过 PMS
的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT），通过其在 570nm 的吸光值大小可反映出 NADK 活性的大小。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 细菌、细胞或组织样本的制备：
细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，95%乙醇调零。
2、 标准品的配制：按下表混合试剂三和标准品配制标准品
标准品（μL） | 试剂三（μL） | 标准管浓度（nmol/mL） |
0 | 50 | 0 |
5 | 45 | 2 |
10 | 40 | 4 |
15 | 35 | 6 |
20 | 30 | 8 |
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