DPPH 自由基清除率检测试剂盒(比色法)

产品简介：

在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基，而自由基的积累会使机体产生氧化损伤而引起衰老、肿瘤、中风、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在众多自由基中 2，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一种较稳定的自由基，当有自由基清除剂存在时颜色由紫色向黄色转变，吸光度随之变小。

Leagene DPPH 自由基清除率检测试剂盒(比色法)又称氮自由基清除能力检测试剂盒或氮自由基清除率检测试剂盒，其检测原理是 DPPH 自由基是一种较稳定的含氮自由基，含一个单电子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在 517nm 下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子与此单电子配对，溶液会褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比，通过吸光度下降的程度来反应样品的氮自由基清除能力，主要用于检测血清、植物组织、抗氧化类食品、保健品及药品等样本。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、蒸馏水、无水乙醇

2、实验材料：植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等

3、研钵或匀浆器或粉碎机或超声破碎机

4、离心机、离心管

5、恒温水浴锅、恒温干燥箱

6、电子天平、30~50 目筛

7、分光光度计、比色皿

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①植物样品：取新鲜植物样本，清洗干净，研钵研碎(粉碎)，干燥箱烘干后过筛，称取0.05g 样品，加入 0.8ml 氮自由基提取液，40℃水浴浸提 30~60min，10000rpm 离心10min，上清液待用，4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。

②血浆、血清和尿液样品：血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝) 4℃ 5000rpm 离心 10min，取上清液待用；血清或尿液样品可直接测定。

③细胞样品：按每 5×10⁶个细胞加入 0.8ml 氮自由基提取液，超声破碎(功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次)，10000rpm 离心 10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等样品：按样品：氮自由基提取液=1：9 的比例震荡混匀，10000rpm离心 10min，上清液待用，4℃保存备用。

⑤高活性样品：如果样品中有效浓度较高，可用提取液进行恰当的稀释。

2、配制维生素 C 溶液：将一支 10mg 维生素 C 充分溶解于 1ml 氮自由基提取液中，即成10mg/ml 维生素 C 溶液；       可分成 0.1ml 的小份，-20℃保存。

3、配制 Vc 标准工作液：如需测线性关系，建议用氮自由基提取液将 10mg/ml 维生素 C 溶液稀释至 20、15、10、8、         6、4、2μg/ml 的 Vc 标准工作液；如需清除率约为 100% 的阳性对照，建议选用大于 30μg/ml 的 Vc 标准工作液。

4、分光光度计开机预热 30min，调节波长 517nm(500~530nm 亦可)，无水乙醇调零。

5、 DPPH 加样：按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管，溶液应按照顺序依次加入，混匀，室温避光静置 30min。