Ca++Mg++-ATP 酶活性检测试剂盒
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 4 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 支 | -20℃保存 |
试剂四 | 液体 2 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体 3 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂七 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂八 | 液体 15 mL×1 瓶 | 常温保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂三：临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水充分混匀待用；现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。
2、 试剂六：临用前加入 15 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。
3、 试剂七：临用前加入 15 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。
4、 标准品：10mmol/L 标准磷贮备液。将标准品 20 倍稀释，即取 0.1 mL 标准品加 1.9 mL 蒸馏水充分混匀， 配成 0.5 μmol/mL 标准磷应用液，现用现配。
5、 定磷剂的配制：按 H2O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据样本量现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。根据Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一， 超声波破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、 酶促反应（在EP管中加入下列试剂）
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
试剂一（μL） | 130 | 90 |
试剂二（μL） | 80 | 80 |
试剂三（μL） | 40 | 40 |
试剂四（μL） | - | 40 |
样本（μL） | - | 200 |
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴10min |
试剂五（μL） | 50 | 50 |
样本（μL） |
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