
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 55 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 A | 粉剂×4 瓶 | 常温保存 |
试剂一 B | 液体 40 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一的配制:临用前取一瓶试剂一 A 加入 10mL 试剂一B,溶解后备用,2-8℃保存一周,若试剂变黄色则已经变质,不能继续使用。
2、 标准品:10mg 木糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 10mg/mL 木糖标准溶液备用。
产品说明:
木糖是一种戊糖。天然D-木糖是以多糖的形态存在于植物中。木糖可以活化人体肠道内的双岐杆菌并促其生长,双歧杆菌是益菌,该菌越多越有益人体健康,食用木糖能改善人体的微生物环境,提高机体的免疫能力;同时木糖在小肠上段吸收后不参与体内的代谢,经肾脏排出。因此,D-木糖的吸收一直作为小肠吸收不良的重要功能指标。
D-木糖在强酸条件下水解产生糠醛,糠醛可与间苯三酚反应生成粉红色化合物,在554 nm处有特殊吸收峰,据此可由吸光值计算出样本中木糖的含量。
技术指标:
最低检出限:0.0007 mg/mL
线性范围:0.0078-0.9 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、鼓风烘箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/ 匀浆器、30-50目筛、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、植物样本:将供试的植物样本在 65℃的鼓风烘箱中烘干,研磨成粉状,过 30-50 目筛。按质量(g):提取液体积(mL)1 : 50~100 比例(建议称取 10mg 烘干样本,加入 0.5 mL 提取液),涡旋混匀,在 100℃水浴锅中准确水解 2 h,然后 10000 rpm,室温离心 15 min,弃沉淀,取上清液待测。
2、组织样本:按质量(g):提取液体积(mL)1 : 5~10 比例(建议称取 0.05g 样本,加入 0.5 mL 提取液), 研磨匀浆后,在 100℃水浴锅中准确水血清解 2 h,然后于 10000 rpm,室温离心 15 min,弃沉淀,取上清液待测。
3、(浆)等液体样本:直接测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至554 nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将标准品用蒸馏水稀释至0.8、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL的标准溶液备用。
3、 标准液稀释可参考下表:
序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(μL) | 蒸馏水体积(μL) | 稀释后浓度(mg/mL) |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 200 | 200 | 0.5 |
4 | 0.5 | 200 | 200 | 0.25 |
5 | 0.25 | 200 | 200 | 0.125 |
6 | 0.125 | 200 | 200 | 0.0625 |
7 | 0.0625 | 200 | 200 | 0.03125 |
8 | 0.03125 | 200 | 200 | 0.015625 |
实验中每个标准管需50μL 标准溶液。
4、 操作表(在0.6 mL EP管中操作):