土壤硝酸还原酶（S-NR）活性检测试剂盒说明书
微量法
产品组成
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 25 mL×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂二 | 液体 5 mL×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 液体 5 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体 5 mL×1 瓶 | -20℃保存 |
试剂五 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂五：如出现结晶析出，60℃水浴溶解后使用；
2、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。
产品说明：
S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。
S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋+H2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α -萘胺定量生成红色偶氮化合物；未反应的NADH会抑制后续的显色反应，用PMS将其中和后再进行后续反应；生成的红色偶氮化合物在 520 nm 有最大吸收峰，可用分光光度计/酶标仪测定。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、30-50目筛、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、 NaNO2标准液的配制：用蒸馏水将标准品稀释1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL。
3、 标准品稀释表：
序号 | 稀释前浓度（μmol/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL） | 稀释后浓度（μmol/mL） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
4 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
5 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
备注：实验中每个标准管需50μL标准溶液。
4、 样本测定：
