淀粉分支酶（SBE）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 25 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体 20 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 支 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 25 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体 5 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
试剂二：临用前加入 1 mL 蒸馏水，缓慢加热，逐渐升温至沸腾，使其充分溶解，备用，2-8℃保存 4 周。
产品说明：
SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定 SBE 活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
淀粉和碘结合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在 660nm 吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。
SBE
Amylopectin Allosteric starch
Amylopectin + Iodine Complex (660nm)
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。15000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定：
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
煮沸1min后灭活的样本 | 250 | |
样本 | | 250 |
试剂一 | 320 | 320 |
试剂二 | 30 | 30 |
混匀，37℃水浴锅/恒温培养箱准确保温20min，置沸水浴中1min终止反应（盖紧防止水分散失），冷却 |
试剂三 | 500 | 500 |
试剂四 | 100 | 100 |
混匀，室温静置 10min，660nm 处读取各管吸光值，分别记为 A 对照管、A 测定管。每个测定管需设一个对照管。
注意：若有样本浑浊，建议离心后取上清测定。
三、SBE 活力单位计算
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在 1mL 反应体系中每分钟降低 1%碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/mg prot) =（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管×100%÷1%÷（Cpr×V 样本）×V 反应÷T
=24×（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管÷Cpr
2、按照样本质量计算
单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 g 组织在 1mL 反应体系中每分钟降低 1%碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/g 质量) =（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管×100%÷1%÷（W÷V 提取×V 样本）×V 反应÷T
=（A 对照管-A 测定管）÷A 对照管÷W×24
V 样本：加入样本体积，0.25mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，
g；V 反应：反应体系体积，1.2mL；T：反应时间，20min。
注意事项：
1、可以在不同对照管中加入不同的样本，然后集中进行 1min 沸水浴处理。
2、试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
