谷氨酰胺酶（GLS）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 70 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 A | 液体 1 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 B | 液体 4 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 5 mL×1 瓶 | 常温保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液：使用前 37℃预热；
2、试剂一：临用前加入 10 mL 提取液充分溶解待用；
3、试剂二 B：临用前将试剂二 A 倒入试剂二 B 中混匀（A:B=1：4 比例），或者根据样本所需，按照体积比试剂二 A：试剂二 B=1:4 现配现用；
4、标准品：10 μmol/mL 氮标准液，使用前 37℃预热。
产品说明：
GLS（EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定 GLS 催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g 离心15 min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。
2、标准液的制备：将标准溶液用提取液稀释32倍得0.3125μmol/mL的标准溶液。
3、样本测定：（在EP管中加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 80 | 80 | - | - |
提取液 | - | 320 | - | 400 |
试剂一 | 320 | - | - | - |
混匀，37℃水浴1小时 | - | - |
标准液 | - | - | 400 | - |
试剂二 | 80 | 80 | 80 | 80 |
试剂三 | 60 | 60 | 60 |
|
