产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 A 液 | 液体 30 mL×1 瓶（自备） | 常温保存 |
提取液 B 液 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 4 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 4 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 4 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 粉剂×2 瓶 | -20℃保存 |
试剂六 | 液体 50 mL×1 瓶（自备） | 常温保存 |
试剂七 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液 A 液：自备无水乙醇；
2、试剂五：临用前取 1 瓶加入 5 mL 蒸馏水溶解备用，可分装后-20℃保存，-20℃保存一周；
3、试剂六：自备浓盐酸；
4、标准品：10 mg 尿囊素。临用前加入 632.5 μL 蒸馏水配制成 100 μmol/mL 酰脲标准液。
产品说明：
选育高固氮活性豆科植物品种是提高豆科植物固氮能力的一个有效途径。豆科植物根瘤菌固氮的最初输出产物主要是酰脲（尿囊素和尿囊酸）。酰脲是豆科植物一根瘤菌共生固氮中的氮代谢产物，是氮素贮藏和运输的主要形式，在豆科植物氮代谢中起着重要作用。可通过测定豆科植物组织中酰脲的含量，从而评估其固氮能力。
尿囊素在过酸或碱条件下水解产生乙醛酸，然后在苯肼和强酸条件下可被氧化，生成红色络合物，在 535 nm 处有特殊吸收峰，据此可由吸光值计算出样本中酰脲的含量。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、鼓风烘箱、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、30~50 目筛、研钵、冰和蒸馏水、无水乙醇、浓盐酸和 EP 管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
植物样本：将供试的植物样本在 65℃的鼓风烘箱中烘干，研磨成粉状，过 30~50 目筛。按质量（g）︰提取液体积（mL）1︰10~20 比例（建议称取 0.1 g 烘干样本，依次加入 1.0 mL 提取液 A 与 1.0 mL 提取液 B，禁止将提取液 A 与提取液 B 混匀待用），漩涡混匀，在 80℃水浴锅中萃取 5 min，然后 3500 rpm，室温，离心 15 min，
弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 535 nm，蒸馏水调零。
2、将试剂六与试剂七置于冰水浴中预冷 30 min 以上，并置于冰上待用。
3、 标准液的处理：将标准品配制成 100 μmol/mL 的标准液后，用蒸馏水稀释至 12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125 nmol/mL 的标准溶液备用。
4、操作表：（在 1.5mL EP 管中操作）
| 对照管 | 尿囊酸测定管 | 酰脲测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本（μL） | 400 | 400 | 400 | - | - |
标准溶液（μL） | - | - | - | 400 | - |
蒸馏水（μL） | - | - | - | - | 400 |
试剂一 （μL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
试剂三（μL） | - | 100 | - | - | - |
- | 充分混匀，沸水浴 7 min，冷却至室温。 |
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