土壤羟胺还原酶（S-HR）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 15mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 50mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体 15mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体 10mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂七 | 液体 10mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂可以 2-8℃保存一周；
2、 试剂三：临用前沸水浴中加热 15min，开盖 10s 后立即拧紧盖子，待自然冷却后再使用。使用过程中尽量不要敞口放置，取完立即加盖拧紧。若长期敞口放置，可再次沸水浴 10min（盖盖儿）冷却至常温使用；
3、 试剂四：临用前加 30mL 蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。用不完的试剂 2-8℃保存 2周；
4、 标准品：临用前加 1.028mL 蒸馏水充分溶解，制备 140μmol/mL 盐酸羟胺标准溶液待用，2-8℃保存 2 周。
产品说明：
土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体，其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。
硫酸铁铵中的Fe3+可将羟胺氧化为氮气，自身被还原为Fe2+，Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗啉形成橙红色配合物，在 510nm 处有吸收峰，羟胺还原酶作用于羟胺，使配合物形成量减少，510nm 处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、天平、水浴锅、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、30-50目筛、漩涡震荡仪、 氮吹仪、研钵、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱烘干，过 30-50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释：将140μmol/mL标准液用蒸馏水稀释至4.375、2.1875、1.094、0.547、0.2735、0.13675μmol/mL 的标准液备用。具体稀释可参考下表：
序号 | 稀释前浓度（μmol/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL） | 稀释后浓度（μmol/mL） |
1 | 140 | 50 | 1550 | 4.375 |
2 | 4.375 | 500 | 500 | 2.1875 |
3 | 2.1875 | 500 | 500 | 1.094 |
4 | 1.094 | 500 | 500 | 0.547 |
5 | 0.547 |
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