产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 25 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 2 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前加入 4mL 蒸馏水溶解后待用；
2、标准品：临用前加入 792μL 蒸馏水配制成 100 μmol/mL 草酸标准溶液；
产品说明：
草酸是一种二元羧酸，广泛存在于植物界中，且在不同领域有着不同的作用：在医药、印染、塑料等工业生产中，草酸可用作制药原料、络合剂、漂白剂、沉淀剂以及还原剂等；从食品角度看，长期食用草酸含量高的蔬菜， 容易引发关节炎、低血钙、膀胱结石和肾结石等疾病，而被认为是矿物元素的拮抗物。
Fe3+在 pH 为 2 的条件下可以与磺基水杨酸生成紫色络合物，在 510 nm 处有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使 Fe3+与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，且 Fe3+与磺基水杨酸络合物的吸光度随着草酸量的增加而降低，据此可由降低的吸光值计算出样本中草酸的含量。
技术指标：
最低检出限：0.0982 μmol/mL
线性范围：0.75-25 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照质量（g）：蒸馏水体积（mL）为 1:5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 蒸馏水）充分匀浆， 然后加入少许试剂四（约 3-5mg），震荡混匀后置于 75℃水浴锅脱色 30 min，期间摇晃 2-3 次，脱色后常温 3000 r/min 离心 15 min，取上清置于冰上待测（若组织沉淀与试剂四不能离心去除时，建议将上清多离心几次；若一次脱色不完全时，建议重复脱色至溶液呈无色或略呈乳白色）。
二、测定步驟
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 510 nm，蒸馏水调零。
2、将 100 μmol/mL 的草酸标准液用蒸馏水稀释为 25、20、15、12、6、3、1.5、0.75μmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表 (在 1.5 mL 离心管中操作) ：
试剂名称（μL） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
试剂一 | 50 | 50 | 50 |
试剂二 | 375 | 375 | 375 |
试剂三 | 25 | 25 | 25 |
蒸馏水 | 50 | - | |
样本 | - | 50 | - |
标准溶液 | - | - | 50 |
蒸馏水 | 500 | 500 | 500 |
混匀，室温静置 20 min |
于 1 mL 玻璃比色皿中测定 510 nm 处吸光值A，分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA=A空白管-A 测定管，ΔA 标准=A 空白管-A 标准管。同一批检测样本需测 1-2 个空白管（标准管只需检测 1-2 次）。 |
注意：如果检测样本量大，可以根据样本所需按照试剂一:试剂二:试剂三=2:15:1（v:v:v）的比例配制成工作液现配现用，加样体系为 450 μL 工作液，50 μL 样本（蒸馏水或标准溶液），500 μL 蒸馏水。
三、草酸含量计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y= kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（μmol/mL）。
2、 草酸含量的计算：
草酸含量（mg/g 质量）= x×V 提取×M×10-3÷W=0.09x÷W
V 提取：加入的蒸馏水体积，1mL；W：样本质量，g；M：草酸分子质量 90.04；10-3：单位换算系数，1
μg=10-3 mg。
注意事项：
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、如将试剂一、试剂二与试剂三配成工作液使用时，按照配制比例根据样本量所需现配现用，不得一次性配完待用。
