植物组织果糖（FT）含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 110 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 40 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 10 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 粉剂 0.5 g×1 瓶 | 常温保存 |
溶液的配制：
试剂一：10mg 果糖。临用前加 1mL 蒸馏水溶解，得到 10mg/mL 的果糖标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：
果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。
H+
Fructose + Resorcinol Colored Compound（480nm）
技术指标：
最低检出限：0.0141 mg/mL
线性范围：0.25-25 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 样本，常温研碎；加入 1mL 提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于 80℃水浴锅中
10min（盖紧，以防止水分散失），振荡 3~5 次，冷却至室温后，4000g，常温离心 10min，取上清；加入少量（约
2mg）试剂四，80℃脱色 30min（盖紧，以防止水分散失）；再加入 1mL 提取液，4000g，常温离心 10min，取上清液测定。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一的稀释：取200μL 10mg/mL果糖标准液，加入300μL蒸馏水，充分混匀，配制成4mg/mL标准液使用， 现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3、 样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 | | | 100 |
试剂一 | | 100 | |
蒸馏水 | 100 | | |
试剂二 | 700 | 700 | 700 |
试剂三 | 200 | 200 | 200 |
涡旋混匀，置于 80℃水浴锅中准确反应 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后测定 480nm 处光吸收值，记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管，并计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管、ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准管和空白管只需测 1-2 次。
三、果糖含量计算
1、按样本蛋白浓度计算
果糖含量（mg/mg prot）=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V 样总÷（Cpr×V 样总）=4×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
2、按样本质量计算
果糖含量（mg/g 质量）=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V 样总÷W =8×ΔA测定÷ΔA标准÷W
C标：标准品浓度，4mg/mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样总：提取液体积，2mL。
注意事项：
如果样本吸光值大于1.3，建议将样本用提取液稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。
