维生素 B6（VB6）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 18 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 15 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 20 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；
2、试剂四：临用前加入 20 mL 蒸馏水混匀，4℃保存一周，如果一次性用不完，可分装于-20℃保存待用；
3、标准品：10mg 维生素 B6，临用前加入 1 mL 试剂一，配成 10 mg/mL 的标准液。
产品说明：
维生素 B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。
VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在 400nm 有特征吸收峰。
技术指标：
最低检出限：0.0162 mg/mL
线性范围：0.015625-1 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清测定（动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无混浊）。
细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 0.6mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清测定。
液体：直接检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2. 将 10mg/mL 标准液用试剂一稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。
3. 操作表：在 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂：
| 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本（μL） | 200 | 200 | - | - |
试剂一（μL） | - | - | - | 200 |
标准溶液（μL） | - | - | 200 | - |
试剂二（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
试剂三（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 |
试剂四（μL） | - | 300 | 300 | 300 |
蒸馏水（μL） | 300 | - | - | |
充分混匀，25℃反应 20min，测定 400nm 处吸光值，记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA=A 标准管-A 空白管。（空白管只要做 1-2 管） |
