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商品参数

商品描述

乙酰胆碱酯酶（ AchE） 活性检测试剂盒 可见分光光度法

产品组成：

溶液的配制：

产品说明：

AchE 属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

AchE 催化 Ach 水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB

在 412nm 处有吸收峰，通过测定 412nm 吸光度增加速率，计算 AchE 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清液待测。

2、细菌、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

二、测定步骤

1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、样本测定：

试剂名称(μL)	测定管	对照管
样本	30	30
试剂二	100	-
37℃ 水浴准确反应5min。
试剂四	100	100
试剂二	-	100
混匀后12000rpm常温离心5min。分别吸取50μL上清液于新的EP管中，之后分别加入。
试剂一	850	850
试剂三	100	100
混匀，放置2min后测定412nm处的吸光度，记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照管。