游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 50 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶（自备） | 常温保存 |
试剂二 | 液体 16 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 常温保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：实验前一天，取一个玻璃瓶，按照正庚烷：无水甲醇：氯仿=24:1:25 的比例配置（自备），盖紧后混匀；
2、试剂三：临用前每瓶加入 32 mL 无水乙醇充分溶解，4℃可保存一周；
3、标准品：临用前把试剂转移到 10 mL 玻璃瓶中，加入 7.8 mL 氯仿充分溶解，即为 5μmol/mL 的棕榈酸标准溶液，4℃保存。
产品说明：
FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于氯仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。
技术指标：
线性范围：0.025-0.8 μmol/mL
检出限：0.012 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、冰、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、一个 50mL 玻璃瓶、一个 10 mL 玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿（三氯甲烷）、无水乙醇和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、血清中 FFA 测定：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃离心机 3500 rpm 离心 15min，取上层血清置于
4℃冰箱保存，待测。
2、组织中 FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约 0.1g，加入 1.0 mL
提取液，匀浆后，8000rpm，4℃离心 10min，取上清液，待测。
二、测定步骤
- 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm，无水乙醇调零。
- 试剂二在 37℃水浴中预热 30 min 以上。
- 标准品的稀释：将标准品用氯仿稀释成 0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL。
- 按下表在 1.5mL 离心管中加入相应试剂
| 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
蒸馏水（μL） | 50 | | | |
样本（μL） | | 50 | | |
氯仿（μL） | | | 50 | |
标准品（μL） | | | | 50 |
试剂一（μL） | 500 |
试剂二（μL） | 200 |
充分振荡10min后，3000rpm，离心10min |
上层溶液（μL） | 200 |
试剂三（μL） | 800 |
充分振荡2min后，静置15min，于550 nm下测吸光值，分别记为A对照管、A测定管、A 空白管、A标准管（对照管和空白管各只做1-2管）。 |
三、FFA 含量计算
1、标准曲线的绘制：以标准溶液的浓度为x轴，以ΔA标准（ΔA=A标准管-A空白管）为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将ΔA（ΔA=A测定管-A对照管）带入方程得到x。
2、血清中FFA含量计算： FFA（μmol/L）=1000x
3、组织中FFA含量计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算
FFA含量（μmol/mg prot）=x×V样总÷（Cpr×V样总）=x÷Cpr
- 按样本质量计算
FFA（μmol/g 质量）=x×V样总÷W
V样总：上清液总体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。1000：单位换算系数， 1L=1000mL。
注意事项：
1、试剂三配制应尽量晚配，可在操作到加入试剂二时，再配制试剂三。
2、必须保证每管的震荡频率及时间一致。
3、尽量在 30min 内完成测量，并且测完后要密封好再丢弃。
4、因所用试剂多数为有机溶剂，同一支吸头多次吸取会造成体积不准确，建议更换吸头。
