组织铁含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 55 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准液 | 液体 3 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前配制，加入 7.5 mL 蒸馏水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用；
2、试剂二：临用前配制，加入 375 μL 冰醋酸，加入 12 mL 蒸馏水充分溶解；溶解后 4℃保存一周；
3、标准液：1 μmol/mL Fe3+标准液。临用前稀释 8 倍即 0.125 μmol/mL 的标准溶液进行实验，现用现配。
产品说明：
铁是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。
亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。
技术指标：
最低检出限：0.00009449 μmol/mL
线性范围：0.0039-0.25 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。4000g 4℃离心 10 分钟，取上清。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计预热30min，波长调至520nm。蒸馏水调零。
2. 加样表：
加入试剂（μL） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
蒸馏水 | 400 | - | - |
0.125μmol/mL标准液 | - | - | 400 |
样本 | - | 400 | - |
试剂一 | 200 | 200 | 200 |
试剂二 | 400 | 400 | 400 |
混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入200μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm， 离心10min，小心吸取上层液800μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管、A 测定管、A标准管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管，ΔA测定=A测定管-A空白管。 |
三、组织铁含量计算
1．按组织质量计算
组织铁含量（μg/g 质量）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷W=6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W 2．按组织蛋白浓度计算
组织铁含量（μg/mg prot）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）
=6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
C标准液：0.125μmol/mL Fe3+标准液；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；55.845： Fe的相对分子质量，55.845μg/μmol。
注意事项：
1、当ΔA大于0.9时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。
2、试剂一溶解变黑后则不能使用；试剂二有毒性，做好防护措施。
