组织无机磷含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂三：临用前配制，加入 10 mL 蒸馏水，充分溶解后加入 5mL 试剂二，混匀；
2、标准品：1mmol/L 无机磷标准液。
产品说明：
无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等， 此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。
钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量。
技术指标：
最低检出限：0.0576 mmol/L
线性范围：0.0625-2 mmol/L
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、无机磷提取（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织，加试剂一 1.0 mL 冰上充分匀浆，4℃，10000rpm，离心 10min，取上清液，待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2. 打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3. 测定：
试剂名称（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
标准液 | | 50 | |
上清液 | | | 50 |
蒸馏水 | 500 | 450 | 450 |
试剂三 | 500 | 500 | 500 |
混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，分别记为 A 空白管、A 标准管、A
测定管。注意：需在 40min 内完成比色。三、组织无机磷含量计算
无机磷含量(mmol/g 质量) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W
= 0.001×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W C 标准液：1mmol/L；V 总：上清液总体积，1mL=0.001 L；W：样本质量，g。
注意事项：
1、试剂三需临用前配制，限当天使用。
2、测定前先用 1~2 个样本做预实验，如吸光值大于 0.8，需用蒸馏水做相应稀释。
