血氨含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 40 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
提取液二 | 液体 40 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 A 液 | 液体 7 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 B 液 | 液体 28 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 35 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前将 A 液与 B 液按照体积比 1:4 混匀，根据试验所需量现配现用；
2、标准品：100μmol/mL 氮标准液。
产品说明：
血氨主要来源是内源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定状态，即血氨的来源和去路保持动态平衡。氨是有毒物质，主要在肝脏进行代谢解毒。当肝功能严重损害时，氨不能被解毒。氨在中枢神经系统聚集，从而导致肝性脑病。
本法根据氨的靛酚蓝反应原理，通过蛋白沉淀剂将血清（浆）中蛋白沉淀后，利用酚-次氯酸盐直接显色法测定血氨，生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比，在630 nm处有特殊吸收峰，据此可由吸光值计算出样本中血氨的含量。
技术指标：
最低检出限：0.0258 μmol/mL
线性范围：0.125-3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、蒸馏水、EP管。
适用范围：
本试剂盒可测各种动物血清（浆）等样本中血氨的含量。
操作步骤：
一、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 630 nm，蒸馏水调零。
2、标准品的准备：将 100 μmol/mL 的氮标准液用蒸馏水稀释至 3、2、1、0.5、0.25、0.125 μmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表：（在 1.5 mL EP 管中操作）
试剂名称（μL） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
血清（浆） | | 200 | |
标准品稀释液 | | | 200 |
蒸馏水 | 200 | | |
提取液一 | 500 | 500 | 500 |
提取液二 | 500 | 500 | 500 |
充分混匀，3500 rpm 离心 10 min，取上清待测 |
上清液 | 400 | 400 | 400 |
试剂一 | 400 | 400 | 400 |
试剂二 | 400 | 400 | 400 |
充分混匀，37℃水浴 20 min |
取 1 mL 反应液，于 1 mL 玻璃比色皿中测定 630 nm 处吸光值A，分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA= A 测定管-A 空白管，ΔA 标准= A 标准管-A 空白管。 |
二、血氨含量计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y= kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（μmol/mL）。
2、 血氨含量的计算：
血氨含量（μmol/mL）= x×V 样÷V 样= x V 样：加入的样本体积，0.2 mL。
注意事项：
1. 同一批检测样本需配 1-2 个空白管。
2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
3. 试剂一配置后尽快使用，若发现变色则不能使用。
4. 所用器材和取血装置均应无氨；采血后应立即测定，不能立即测定 2-8℃可保留 2h；样本禁止溶血。
