产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 50 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前加入 25 mL 试剂二，充分溶解；
2、试剂三：临用前加入 25 mL 蒸馏水，充分溶解。
产品说明：
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆或者 0.1mL 胃液加入 0.9mL 提取液。10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至275nm，蒸馏水调零。
2、操作表：
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 100 | - |
试剂一 | 500 | 500 |
混匀，37℃保温 10min。 |
试剂三 | 500 | 500 |
摇匀 1min。 |
样本 | - | 100 |
混匀后 10000rpm 4℃ 离心 10min，取上清用 1mL 石英比色皿，测定 A275nm，记为 A 测定和 A 对照，计算?A=A 测定-A 对照。 |
注意：对照管后加样本，而测定管先加样本
三、胃蛋白酶活性计算
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T=0.786×?A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=（?A÷ε÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T=0.786×?A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T=7.86×?A
Cpr：样本蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V 反总：反应总体积，1.1mL；V 提：提取液体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.1mL；ε：酪氨酸吸光系数，1.4mL/μmol/cm； d：光程，1cm；V 液：液体体积，0.1mL。
