葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：

溶液的配制：
1、工作液的配制：取 20 mL 试剂一和 4 mL 试剂二混匀（现配现用）；
2、试剂三：融化后可分装-20℃保存。

产品说明：
GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
GOD催化葡萄糖氧化产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
（1） 组织处理：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
（2） 细菌、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎（功率 20%或 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
（3） 血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2、加样表：

样本测定前将 GOD 工作液与试剂三放入 37℃水浴中保温，然后将上述试剂按顺序加入 1mL 玻璃比色皿中， 加样本的同时开始计时；在 500nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 及 2 小时 20 秒时的吸光度 A2。计算ΔA=A2-A1。
三、GOD 活力单位的计算
（1） 按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V 样)÷T= 666.67×ΔA÷Cpr
（2） 按样本质量计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/g 质量）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T= 666.67×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞数量计算
单位的定义：每1万细菌或细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/g 质量）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(500÷V 提取×V 样)÷T= 1.333×ΔA÷W
（4） 按血清（浆）体积计算
单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷V 样÷T= 666.67×ΔA
V反总：反应总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞数量，500万；d：光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10 -3mL/μmol/cm；T：反应时间，2小时。
注意事项：
1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样，做正式试验之前请做 1-2 次预实验，若 A2-A1>0.8，则说明组织活力太高， 必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使 A2-A1<0.8，以提高检测灵敏度。实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。
2、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。