Na+K+-ATP 酶检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 4 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 支 | -20℃保存 |
试剂四 | 液体 2 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体 3mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂七 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂八 | 液体 15 mL×1 瓶 | 常温保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂三：用时取 1 支加 1 mL 蒸馏水，现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。
2、试剂六：用时加入 15 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。
3、试剂七：用时加入 15 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。
4、标准品：10 μmol/mL 标准磷贮备液。将标准品 20 倍稀释，即取 0.1 mL 标准品加 1.9 mL 蒸馏水充分混匀， 配成 0.5 μmol/mL 标准磷应用液。
5、定磷剂的配制：按 H2O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据实验用量现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
Na+K+- ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。Na+K+-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性。
ATP ADP + Pi
Na+ K+-ATPase
Molybdenum Blue
Phosphomolybdate Blue（660nm）
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌、细胞或组织样本的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一， 超声波破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应（在 EP 管中加入下列试剂）
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
试剂一（μL） | 130 | 90 |
试剂二（μL） | 80 | 80 |
试剂三（μL） | 40 | 40 |
试剂四（μL） | - | 40 |
样本（μL） | - | 200 |
混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 10min |
试剂五（μL） | 50 | 50 |
样本（μL） | 200 | - |
混匀，4000g，常温离心 10min，取上清液 |
3、定磷(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂)
试剂名称 | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
0.5μmol/mL 标准磷应用液（μL） | - | 100 | - | - |
上清液（μL） | - | - | 100 | 100 |
蒸馏水（μL） | 100 | - | - |
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