脂蛋白酯酶（LPL）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 60 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入 1.5 mL 丙酮溶解备用；
2、标准品：5 μmol/mL 对硝基苯酚标准溶液。
产品说明：
脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯，主要在肝脏实质细胞中合成，在脂质代谢和转运中发挥重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、将5μmol/mL标准液用试剂一稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。
3、操作表：在1.5mL EP管中进行下列操作：
样本名称 | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本（μL） | 100 | 100 | - | |
标准管（μL） | - | - | 100 | |
蒸馏水（μL） | - | - | - | 100 |
试剂一（μL） | 400 | 360 | 400 | 400 |
试剂二（μL） | - | 40 | - | - |
混匀，45℃水浴10min | - | - |
试剂三（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混匀放置 2min 后，对照管和测定管 8000g 常温离心 10min，取上清、标准管和空白管于 1mL 玻璃比色皿中测定 400nm 处吸光值，记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管，ΔA=A测定管- A 对照管， ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 |
三、LPL活性计算
1、血清（浆）LPL活力计算
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL（U/mL）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准
2、组织、细菌或细胞中LPL活力计算
- 按样本质量计算
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL（U/g 质量）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷W
- 按样本蛋白浓度计算
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（V提取×Cpr）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷Cpr
- 按细菌或细胞数量计算：
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每104个细胞每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。LPL（U/104 cell）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA标准
C标准：标准溶液浓度，0.3125μmol/mL；V提取：加入试剂一体积，1mL
