总巯基含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 40 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体 55 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 2.5 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
标准品：10 mg 还原型谷胱甘肽（GSH）。临用前加入 1.3 mL 蒸馏水，配制称 25 μmol/mL，2-8℃保存两周。
产品说明：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。
Sulfhydryl Group + 5, 5,- Dithiobis-2-Nitrobenoic acid 2-Nitro-5-Mercaptobenzoic Aicd (412nm)
技术指标：
最低检出限：0.0048 μmol/mL
线性范围：0.0078-0.5 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、恒温水浴锅、天平、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（称取称取约 0.1g 组织，加入 1mL
的提取液），冰浴匀浆，8000g，常温离心 10min，取上清待测。
2. 血清，培养液：直接测定。若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2. 标准液的稀释：将25μmol/mL标准溶液用蒸馏水稀释至0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625μmol/mL 的标准液，现用现配。
3. 标准液稀释可参考下表:
序号 | 稀释前浓度（μmol/mL） | 标准液体积（μL） | 蒸馏水体积（μL） | 稀释后浓度（μmol/mL） |
1 | 25 | 20 | 980 | 0.5 |
2 | 0.5 | 500 | 500 | 0.25 |
3 | 0.25 | 500 | 500 | 0.125 |
4 | 0.125 | 500 | 500 | 0.0625 |
5 | 0.0625 | 500 | 500 | 0.03125 |
6 | 0.03125 | 500 | 500 | 0.015625 |
备注：实验中每个标准管需 200μL 标准溶液。
4. 操作表
试剂名称 | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本（mL） | 0.2 | 0.2 | - | - |
标准品（mL） | - | - | 0.2 | - |
试剂一（mL） | 0.75 | 0.75 | 0.75 | 0.75 |
试剂二（mL） | - | 0.05 | 0.05 | - |
H2O（mL）
|
