非蛋白质巯基含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 25 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液体 25 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液的配制：将提取液一和提取液二按体积比 1：1 的比例混合配制，按照样本数量配制并在当天用完；
2、试剂二：临用前加入 5 mL 无水甲醇充分溶解备用，2-8℃保存八周；
3、标准品：10 mg 半胱氨酸，临用前加入 1.65 mL 提取液配制成 50 μmol/mL 的半胱氨酸标准溶液备用，2-8℃ 保存 1 个月。
产品说明：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义。
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
DTNB
Non-Protein Thiol 2- Nitro-5-Mercaptobenzoic Acid (412nm)
技术指标：
最低检出限：0.0007 μmol/mL
线性范围：0.003125-0.3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、甲醇、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 动物、植物组织：称取约 0.1g，加入 1mL 的提取液，制备成 10%的匀浆，10000g，常温离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细胞（功率 200w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min），然后 10000g，常温离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 血清（浆）、培养液等液体样本：向 0.1mL 血清（浆）、培养液等液体样本中加入 1mL 提取液，10000g，常温离心 10min，取上清置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、标准品的制备：将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的标准液待测，现用现配，具体稀释可参考下表。
序号 | 稀释前浓度（μmol/mL） | 标准液体积（μL） | 提取液体积（μL） | 稀释后浓度（μmol/mL） |
1 | 50 | 100 | 900 | 5 |
2 | 5 | 100 | 900 | 0.5 |
3 | 0.5 | 150 | 350 | 0.3 |
4 | 0.5 | 200 | 800 | 0.2 |
5 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
6 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
7 | 0.05 | 500 | 500 | 0.025 |
8 | 0.025 | 500 | 500 | 0.0125 |
9 | 0.0125 | 500 | 500 | 0.00625 |
10 | 0.00625 | 500 | 500 | 0.003125 |
备注：实验中每个标准管需300μL标准溶液。
3．操作表
