谷氨酸（Glu）含量检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

溶液的配制：

1、试剂三：临用前加入 55 mL 试剂一；

2、试剂四：临用前加入 3.5 mL 试剂二；

3、标准品液：10 μmol/mL 谷氨酸标准品。

产品说明：

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH +，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。

技术指标：

最低检出限：0.023 μmol/mL

线性范围： 0.025-0.5 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

细菌、细胞：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 1000 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），10000rpm，常温离心 10min，取上清待测。

组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心 10min，取上清待测。

二、测定步骤

1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、标准溶液的制备：将标准品分别稀释为0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液。

3、在1mL石英比色皿中加入下列试剂：

a.标准管：在1mL石英比色皿中加入200μL标准溶液、800μL试剂三和50μL试剂四混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算?A标准=A2-A1。

b.测定管：在1mL石英比色皿中加入200μL样本、800μL试剂三和50μL试剂四混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算?A =A2-A1。

三、谷氨酸含量计算

1、标准曲线的绘制：以谷氨酸含量（μmol/mL）为x轴， ?A标准为y轴，绘制标准曲线y=kx+b。将测定管?A带入方程得到x值（μmol/mL）。

2、氨基酸含量计算：

a. 按照蛋白浓度计算：谷氨酸含量（μmol/mg prot）= x×V样本÷（Cpr×V样本）=x÷Cpr。

b.照样本质量计算：谷氨酸含量（μmol/g 质量）= x×V样本÷（W÷V样总×V样本）=x÷W。

c.按照细菌或细胞数量计算：谷氨酸含量（μmol/104 cell）=x×V样本÷（1000÷V样总×V样本）=0.001x。V样总：加入提取液体积，1mL；V样本：加入的样本体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样

本质量，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。

注意事项：

如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。