血磷浓度检测试剂盒说明书（微量法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 110 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准液 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，再缓慢加 272 μL 浓硫酸；
2、试剂三：临用前配制，依次加入 5.5 mL 蒸馏水充分溶解，再加入 0.95 mL 试剂二，充分混合；
3、标准液：5 mmol/L 无机磷，临用前用蒸馏水稀释 5 倍至 1 mmol/L 备用。
产品说明：
血磷主要指血中的无机磷，以无机磷盐的形式存在。血浆中钙、磷浓度关系密切，在以 mg/dL 表示时，二者的乘积(［Ca］×［P］)为 30～40。当(［Ca］×［P］)>40，则钙和磷以骨盐形式沉积于骨组织；若(［Ca］×［P］)<35 则妨碍骨的钙化，甚至可使骨盐溶解，影响成骨作用。血钙和血磷含量的相对稳定依赖于钙、磷的吸收与排泄和钙化及脱钙两种代谢的相对平衡。上述平衡受到维生素 D3、甲状旁腺素和降钙素等激素的调节。
去除血清中有机磷后，无机磷盐与钼酸铵试剂生成磷钼酸，被硫酸亚铁还原后呈蓝色，在 660nm 有光吸收； 通过测定 660nm 吸光度，计算血液中磷含量。
技术指标：
最低检出限：0.0115 mmol/L
线性范围：0.015625-5 mmol/L
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、离心机、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
血清预处理：吸取50μL血清，加950μL试剂一，混匀后室温8000rpm，离心10min，取上清液，待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定：
试剂名称（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
标准液 | | 50 | |
上清液 | | | 50 |
蒸馏水 | 50 | | |
试剂一 | 50 | 50 | 50 |
试剂三 | 100 | 100 | 100 |
混匀后静置10min，于660 nm测定吸光度，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。
三、血磷浓度计算
血磷含量（mmol/L）=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×样本稀释倍数
=20×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液：标准液的浓度，1mmol/L；样本稀释倍数：（50 μL 血清+950μL 试剂一）÷50 μL 血清=20。
注意事项：
1、试剂三需临用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用 3 天；
2、测定过程中，应尽量避免溶血，因为红细胞中有机磷酯进入血清后可被酶水解而使得血清无机磷含量增高；
3、结果于 40min 内测定完毕；
4、如果样本吸光值大于 1.5，建议将样本用试剂一稀释后进行测定。
