血清总铁结合能力（TIBC）检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 50 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 1.5 mL×1 支 | 4℃保存 |
试剂四 A | 液体 2.5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 B | 液体 2.5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 液体 15 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂四：临用前根据用量将 A 液和 B 液按 1:1 混合；
2、标准品：临用前加入0.9mL 蒸馏水溶解，得到40μmol/mLFeSO4?7H2O 溶液。再用蒸馏水稀释至0.25μmol/mL
标准液备用。
产品说明：
血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe3+结合， 剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+，此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe3+释放， 并且进一步被还原成Fe2+，此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。A2减A1与TIBC呈正比。
技术指标：
最低检出限：第一次测量的检出限为 0.0002 μmol/mL；第二次测量的检出限为 0.0017 μmol/mL。
线性范围：第一次测量的线性范围为 0.00195-0.5 μmol/mL；第二次测量的线性范围为 0.00195-0.5 μmol/mL。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、1mL玻璃比色皿、EP管、蒸馏水。
操作步骤：
一、测定步骤（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 562nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
血清 | 100 | - | - |
标准液 | - | - | 100 |
蒸馏水 | - | 100 | - |
试剂一 | 700 | 700 | 700 |
试剂二 | 100 | - | - |
试剂三 | - | 100 | 100 |
混匀，37℃，10min |
试剂四 | 100 | 100 | 100 |
混匀，37℃，5min，蒸馏水调零，测定 562nm 处吸光值，分别记为 A1 测、A1 空、A1 标，并计算 ΔA1 测=A1 测-A1 空、ΔA1 标= A1 标-A1 空。测完后立即加入试剂五 |
试剂五 | 300 | 300 | 300 |
混匀，37℃，5min，蒸馏水调零，测定 562nm 处吸光值，分别记为 A2 测、A2 空、A2 标，并计算 ΔA2 测=A2 测-A2 空、ΔA2 标= A2 标-A2 空。 |
二、血清总铁结合力计算
总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合 Fe3+的 μmol 数。
总铁结合能力 TIBC（μmol/L）=C 标准×ΔA2 测÷ΔA2 标-C 标准×ΔA1 测÷ΔA1 标
=250×（ΔA2 测÷ΔA2 标-ΔA1 测÷ΔA1 标）
C 标准：标准液浓度，0.25μmol/mL=250μmol/L。
注意事项：
1. A1 测小于 0.1 时，建议将样本用蒸馏水适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂二、试剂四有一定的毒性，操作时请做好防护措施。
