谷丙转氨酶（GPT/ALT）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体 30 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×2 支 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体 8 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体 80 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
标准液 | 液体 1 mL×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：同时提供两个 8 mL 棕瓶；临用前取一支试剂一倒入一个空瓶中，用 4 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；
2、标准液：20 μmol/mL 丙酮酸钠溶液。
产品说明：
谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或微生物样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入
1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、标准曲线的稀释：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：
标准品（μL） | 试剂一（μL） | 标准管浓度（μmol/mL） |
60 | 60 | 1 |
48 | 72 | 0.8 |
36 | 84 | 0.6 |
24 | 96 | 0.4 |
12 | 108 | 0.2 |
6 | 114 | 0.1 |
3 | 117 | 0.05 |
0 | 120 | 0 |
3、在EP 管中加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 |
待测样本 | 20 | | |
试剂一 | 100 | 100 | |
标准液 | | | 120 |
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）反应30min
