组织总磷含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 10 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 11 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：强腐蚀性，强氧化性；
2、试剂三：临用前配制，加入 10 mL 蒸馏水，溶解后再加入 5 mL 试剂二，混匀；
3、标准品：1mmol/L 无机磷标准液。
产品说明：
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。
总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。
技术指标：
最低检出限：0.0585 mmol/L
线性范围：0.0625-2 mmol/L
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。
操作步骤：
一、有机磷消化（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1 g 组织于带盖试管中，加浓硫酸 1.0 mL，盖紧（封口膜封口，防止水分散失）后沸水浴 10min 左右， 待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一 200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水 3.8 mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心 10min，取上清液，待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2、打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3、样本测定：
试剂名称（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
标准液 | | 50 | |
上清液 | | | 50 |
蒸馏水 | 500 | 450 | 450 |
试剂三 | 500 | 500 | 500 |
混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，分别记为 A 空白管、A 标准管、A
测定管。
三、组织总磷含量计算
总磷含量(mmol/g 质量)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W
=0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液：1 mmol/L；V 总：上清液总体积，5 mL=0.005 L；W：样本质量，g。
注意事项：
1、试剂三需临用前配制，限当天使用。
2、测定前先用 1~2 个样本做预实验，如吸光值大于 0.8 时，需用蒸馏水做相应稀释。
