血清铁浓度检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
产品组成：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2 瓶 | 4℃保存 |
标准液 | 液体 3 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前加入 10 mL 蒸馏水溶解，现用现配，当天用完；
2、试剂二：临用前配制，每瓶依次加入 313 μL 冰醋酸充分溶解，再加入 10 mL 蒸馏水充分溶解，充分混合。现用现配，当天用完；
3、标准液：1000 μmol/L Fe3+标准液，临用前加蒸馏水稀释 8 倍，125 μmol/L 的标准液进行实验。
产品说明：
血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
亚硫酸钠还原血清 Fe3+生成成 Fe2+，Fe2+进一步与 2,2’-联吡啶显色，在 520nm 处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
技术指标：
最低检出限：3.212 μmol/L
线性范围：3.9-250 μmol/L
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理
血清（浆）直接检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定：
加入试剂（μL） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
蒸馏水 | 400 | - | - |
125μmol/L 标准液 | - | - | 400 |
血清（浆） | - | 400 | - |
试剂一 | 400 | 400 | 400 |
试剂二 | 400 | 400 | 400 |
混匀后盖紧，置于沸水浴 5min，自来水冷却；加入 200μL 氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心 10min，小心吸取上层液 700μL，加入 1mL 玻璃比色皿，于 520nm 立即测定吸光度， 分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。 |
三、血清铁浓度计算
血清铁含量(μmol/L)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
=125×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液：125μmol/L Fe3+标准液。
注意事项：
1、血清铁含量少，所用器皿（EP 管）需要注意，避免被铁污染。
2、如果样本吸光值大于 0.7，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。
