人（Human）乳头瘤病毒（HPV）ELISA 检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被乳头瘤病毒抗体微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中乳头瘤病毒（HPV）的存在与否。样品收集、处理及保存方法
- 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
- 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
- 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
- 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
- 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融， 在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
- 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
- 预处理后的样本无需稀释，直接取 50μL 加样即可。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12 孔×8 条 | 12 孔×4 条 | 无 |
阴性对照 | 0.5mL | 0.5mL | 无 |
阳性对照 | 0.5mL | 0.5mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
样本稀释液 | 6ml | 3ml | |
底物 A | 6mL | 3mL | 无 |
底物 B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2 张 | 2 张 | 无 |
说明书 | 1 份 | 1 份 | 无 |
自封袋 | 1 个 | 1 个 | 无 |
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。洗板方法
- 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
- 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
- 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
- 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各 50μL；
- 待测样本孔加待测样本 50μL；
- 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL
用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干， 如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
- 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
1、试验有效性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15。
2、临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3、阴性判断：样品 OD 值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4、阳性判断：样品 OD 值＞临界值（Cut off），样品为阳性
试剂盒性能
- 准确性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
- 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。
- 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
- 有效期：6 个月
免责声明
- 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
- 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
