人P物质(SP)Elisa试剂盒
使用说明书
用途
本试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中人P物质(SP)的含量。
原理:
采用双抗体夹心法测定人P物质(SP)水平。用纯化的人P物质(SP)抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入HRP标记的P物质(SP)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。颜色的深浅和样品中的P物质(SP)含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），根据标准曲线，计算测试样品中P物质(SP)浓度。
试剂盒组成
序号 | 名称 | 规格 |
1 | 酶标包被板 | 96孔*1可拆卸板 |
2 | 酶标试剂 | 6ml*1瓶 |
3 | 标准品(浓度240ng/L) | 0.6ml*1瓶 |
4 | 标准品稀释液 | 2ml*1瓶 |
5 | 生物素标记的抗SP抗体 | 1.5ml*1瓶 |
6 | 显色剂A液 | 6ml*1瓶 |
7 | 显色剂B液 | 6ml*1瓶 |
8 | 终止液 | 6ml*1瓶 |
9 | 浓缩洗涤液（*30） | 20ml*1瓶 |
10 | 封板膜 | 1张 |
11 | 使用说明书 | 1份 |
实验材料与试剂配制：
1、仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2、洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存
1、细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
2、细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3、血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4、血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。
5、体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
6、组织标本：切取组织标本，称取重量0.05g，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
7、样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
8、保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤：
1、取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2、分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。稀释后各管浓度分别是：120ng/L,60ng/L,30ng/L,15ng/L,7.5ng/L ,0ng/L。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3、加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗SP抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
4、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6、加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
7、
