人斑点热立克次体抗体酶联免疫分析试剂盒

使用说明书

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中斑点热立克次体抗体表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人斑点热立克次体抗体表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中斑点热立克次体抗体相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），与 CUTOFF值相比较，从而判定标本中人斑点热立克次体的抗体存在与否。

试剂盒组成

标本要求

1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2孔、阳性对照 2孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2、加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3、温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。

4、配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7、温育：操作同 3。

8、洗涤：操作同 5。

9、显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

10、终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

计算和结果判定：

1、试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

2、阴性判定：样品 OD值<临界值（CUT OFF）者为人斑点热立克次体阴性阳性判定：样品 OD值≥临界值（CUT OFF）者为人斑点热立克次体阳性

注意事项

1、操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4、封板只限一膜次性使用，以避免交叉污染。

5、底物请避光保存。

6、试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8