植物蔗糖磷酸合成酶(SPS)酶联免疫分析试剂盒
使用说明书

本试剂盒用于植物萃取液或其它相关样本样本中蔗糖磷酸合成酶（SPS）的活性。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断
检测前准备工作：
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成500ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃
3. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
实验所需自备试验器材：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成：

备注：
1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2.标准品浓度S0-S5依次为：0、2.5、5、10、20、40 U/ml
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性。用纯化的植物蔗糖磷酸合成酶(SPS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加蔗糖磷酸合成酶(SPS)，再与HRP标记的蔗糖磷酸合成酶(SPS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蔗糖磷酸合成酶(SPS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性.
样本处理及要求：
1. 样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3. 植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。
4. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
注意事项：
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品,不同批号组分不得混用。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
操作步骤：
1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 （此图仅供参考）

试剂盒性能：
1.检测范围：1U/ml-40U/ml
2.批内与批间应分别小于9%和11%
3.灵敏度：最低检测浓度小于0.1 U/ml